大鼠激活素A(ActA)ELISA试剂盒操作流程详解

大鼠激活素A（Activin A, ActA）ELISA试剂盒是用于定量检测大鼠血清、血浆或细胞培养上清中ActA浓度的常用工具。为确保检测结果的准确性与可重复性，遵循标准化操作流程至关重要。以下为典型双抗体夹心ELISA法的操作步骤：

1. 实验准备： 提前将试剂盒内所有组分（试剂、标准品、样本）从冷藏环境中取出，平衡至室温（约15-30分钟）。检查微孔板是否完整，避免受潮。按说明书配置洗涤液、生物素标记抗体、酶结合物等工作液，避免污染。

2. 样本处理： 采集大鼠血液后，及时离心分离血清或血浆（建议使用EDTA抗凝），避免反复冻融。细胞上清需离心去除碎片。样本可短期4℃保存，长期应-80℃冻存。检测前确保样本无溶血、无脂浊。

3. 加样孵育： 将标准品按梯度稀释后加入指定孔，待测样本加入反应孔（建议设复孔）。立即加入适量生物素标记的抗大鼠ActA抗体，封板后置于37℃恒温孵育一定时间（通常60-90分钟）。孵育后用洗涤液充分洗涤微孔板5次，拍干。

4. 酶标结合与显色： 每孔加入酶结合物（如HRP标记链霉亲和素），封板后37℃孵育30-60分钟。再次彻底洗涤5次。加入TMB显色底物，避光室温或37℃反应10-20分钟，观察颜色变化。

5. 终止与读数： 加入终止液终止反应，溶液颜色由蓝变黄。在15-30分钟内，使用酶标仪在450nm波长处测定各孔吸光度值（OD值），参考波长可设为630nm进行校正。

6. 数据分析： 以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标，绘制标准曲线。根据样本OD值在曲线上查得对应的ActA浓度，再乘以样本稀释倍数，即为原始样本中的浓度。

注意事项：操作全程避免交叉污染，洗涤要充分，孵育时间与温度需严格控制，确保结果可靠。