人心纳素(AtrialNatriureticFactor,ANF),又称心钠肽(ANP),是评估心脏功能的重要生物标志物。采用ELISA法检测其浓度,结果的准确性高度依赖于实验前的充分准备。任何疏漏都可能导致数据偏差或实验失败。为确保实验顺利,以下准备工作必不可少:
1.试剂与耗材核查:实验前务必检查ELISA试剂盒是否在有效期内,各组分(标准品、酶标抗体、底物、终止液等)是否齐全且无污染。提前将试剂平衡至室温(约30分钟),避免冷试剂影响反应温度。同时,准备足量的一次性枪头、EP管、洗瓶,并确保96孔板洁净无划痕。
2.样本预处理:明确样本类型(血清、血浆等),严格按照说明书要求进行采集、离心、分装和保存。避免反复冻融,使用前充分混匀并离心去除杂质。根据试剂盒检测范围,预估样本稀释倍数,准备相应稀释液。
3.标准品配制:精确复溶标准品原液,采用倍比稀释法配制标准曲线。每步稀释需更换枪头,充分混匀,确保浓度梯度准确。标准品宜现配现用,避免降解。
4.设备校准与记录:检查移液器是否校准,确保加样精度。酶标仪需预热并确认波长设置正确(通常为450nm,参考630nm校正)。准备好实验记录本,预先设计好样本排版图,避免加样混乱。
5.环境与防护:在洁净、无强光直射的环境中操作。佩戴手套,防止皮肤油脂污染试剂或样本。
充分的准备是ELISA实验成功的基石。遵循清单,严谨操作,方能获得可靠、可重复的ANF检测结果。