人肝脂酶（HL）ELISA试剂盒标准操作流程详解

人肝脂酶（HepaticLipase,HL）ELISA试剂盒用于定量检测血清、血浆等生物样本中的HL含量，其操作需严格遵循标准化流程，以确保结果准确可靠。以下是标准操作步骤详解：

1.样本与试剂准备

实验前将试剂盒各组分（标准品、酶结合物、底物等）平衡至室温（20–25℃）。样本采集后应离心分离，避免溶血或脂浊，保存于-80℃，避免反复冻融。标准品用稀释液梯度稀释，形成标准曲线点。

2.加样

将空白孔、标准品孔和待测样本孔设置于96孔板。每孔加入50μL标准品或样本，立即加入100μL酶结合物工作液，轻柔混匀后，盖上封板膜，37℃温育60分钟。

3.洗涤

弃去孔内液体，用洗涤液（如1×PBS-Tween20）注满每孔，静置30秒后甩干，重复5次。拍干板底，避免交叉污染。

4.显色与终止

每孔加入显色底物溶液（如TMB）100μL，37℃避光温育15–20分钟，观察颜色变化。随后加入终止液50μL，使溶液由蓝色转为黄色。

5.读数与分析

使用酶标仪在450nm波长测定各孔吸光度（OD值），以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线，根据样本OD值计算HL浓度。

注意事项：操作过程避免阳光直射，加样均匀迅速，确保温育时间与温度准确，以提高重复性与检测精度。