人心纳素（ANF）酶联免疫试剂盒操作注意事项

人心纳素（Atrial Natriuretic Factor, ANF），又称心房利钠肽，是由心房肌细胞分泌的重要激素。使用酶联免疫吸附测定（ELISA）试剂盒检测ANF浓度是科研与临床研究中的常用手段。为确保检测结果的准确性与可重复性，操作过程中需注意以下关键事项：

1.样本处理规范：建议使用血浆（EDTA抗凝）或血清样本，避免溶血或脂血干扰。采集后应立即离心（2–8℃，3000 rpm，10分钟），分离后分装保存于-80℃，避免反复冻融。检测前在冰上解冻，轻柔混匀，必要时按说明书进行预稀释。

2.试剂平衡与配制：所有试剂（包括标准品、酶结合物、缓冲液等）在使用前需平衡至室温（18–25℃），以避免温度差异影响反应效率。标准品应现用现配，梯度稀释时确保移液准确，避免交叉污染。

3.精确加样与孵育：加样时避免气泡，贴壁加样以减少误差。每步孵育需严格控制时间与温度（通常为37℃），使用封板膜防止蒸发。洗板应彻底，推荐使用自动洗板机，确保每孔洗涤3–5次，避免残留影响背景值。

4.显色与读数及时：加入显色液后应避光反应，达到预定时间立即加入终止液。显色完成后需在10分钟内完成OD值读取，波长通常为450 nm，参考波长630 nm校正。

5.数据处理严谨：绘制标准曲线应采用四参数拟合（4-PL）或线性回归，剔除异常点，确保R2 ≥ 0.99。样本浓度超出检测范围时需重新稀释复测。

遵循以上操作规范，可有效提升人心纳素ELISA检测的准确性与可靠性，为心血管疾病研究提供有力支持。