大鼠吡啶交联物(PY)ELISA试剂盒检测原理与操作流程

大鼠吡啶交联物（Pyridinoline, PY）是胶原蛋白降解的特异性产物，主要存在于骨和软骨组织中。当骨吸收活跃时，PY从骨基质释放入血并经尿液排泄，因此其水平可作为评估骨代谢状态、尤其是骨吸收程度的重要生物标志物。大鼠PY ELISA试剂盒采用双抗体夹心法（Sandwich ELISA）进行定量检测。

检测原理

试剂盒预先在微孔板上包被了能够特异性识别大鼠PY的捕获抗体。当加入含PY的样本（如血清、血浆或尿液）后，PY分子会与固相抗体结合。洗去未结合物质后，加入生物素标记的检测抗体，该抗体与PY分子的另一表位结合，形成“固相抗体-抗原-生物素抗体”夹心复合物。再次洗涤后，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，其可特异性结合生物素。最后加入显色底物TMB，HRP催化TMB显色，颜色深浅与样本中PY含量成正比。反应终止后，用酶标仪在450nm波长处测定吸光度（OD值），通过标准曲线即可计算出样本中PY的浓度。

标准操作流程

1.准备：将试剂盒各组分平衡至室温，标准品梯度稀释，样本适当稀释。

2.加样：向包被抗体的微孔中加入标准品或待测样本，37℃孵育1-2小时。

3.洗板：甩去液体，用洗涤液洗板3-5次，拍干。

4.加检测抗体：每孔加入生物素标记抗体，37℃孵育1小时，洗板。

5.加酶结合物：加入HRP标记的链霉亲和素，37℃孵育30-60分钟，洗板。

6.显色：每孔加入TMB显色液，避光37℃孵育15-30分钟。

7.终止：加入终止液，溶液转为黄色。

8.读数与计算：在450nm处测定OD值，绘制标准曲线并计算样本PY浓度。

该方法灵敏度高、特异性强，是大鼠骨代谢研究中不可或缺的工具。注：该产品仅供科学研究,不用于临床诊断。

文章来源：http://www.xinyubiodetect.com/