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ELISA试剂盒的典型组成:

一个标准的ELISA试剂盒通常包含以下组件:

1、预包被微孔板: 96孔或48孔塑料板,孔内已预先包被好捕获抗体或抗原(根据类型而定)。这是反应发生的场所。

2、酶标二抗(或酶标检测抗体/抗原): 根据ELISA类型,提供辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记的二抗(用于间接法或夹心法),或酶标抗原(用于竞争法)。

3、标准品: 已知 浓度的抗原(或抗体)系列梯度溶液。用于绘制标准曲线,计算样本中待测物的浓度。

4、检测抗体(仅夹心法): 未标记的、针对抗原另一表位的抗体。

5、样品稀释液: 用于稀释样本,使其基质与标准品和缓冲体系匹配,减少非特异性干扰。

6、洗涤缓冲液: 通常为含吐温-20的磷酸盐缓冲液。用于在各步骤之间洗去未结合的物质,减少背景干扰。洗涤是否 是实验成败的关键!

7、封闭液: 常用牛血清白蛋白或脱脂奶粉溶液。用于在包被后封闭微孔板上未结合的位点,防止后续步骤中的非特异性吸附,降低背景。

8、底物溶液:

对于HRP:常用四甲基联苯胺或3,3',5,5'-四甲基联苯胺。

对于AP:常用对硝基苯磷酸酯。

9、终止液:

对于HRP-TMB:常用稀硫酸溶液。

对于AP-pNPP:常用氢氧化钠溶液。用于终止酶促反应,稳定最终颜色。

10、板封膜: 在孵育步骤中覆盖微孔板,防止蒸发和污染。

11、说明书: 详细的操作步骤、试剂保存条件、注意事项、预期结果和标准曲线绘制方法等。

样本处理及要求:

1. 血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

2. 血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

3. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。 将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。

4. 细胞培养物上清:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。

5. 其它生物标本:1000×g离心20分钟,取上清即可检测。

6. 样品外观:样品应清澈透明,悬浮物应离心去除。

7. 样品保存:样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃,若不能及时检测,请按一次使用量分装,冻存于-20℃(1个月内检测),或-80℃(6个月内检测),避免反复冻融,标本溶血会影响 检测结果,因此溶血标本不宜进行此项检测。

实验结果计算:

绘制标准曲线:以所测标准品的OD值为横坐标,标准品的浓度值为纵坐标,在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线,并得到直线回归方程,将样品的OD值代入方程,计算出样品的浓度。

XYU-M02357 小鼠黄素单氧化酶3(FMO3)ELISA试剂盒   心语检测(XinYu BioDetect)  

XYU-M02358 小鼠前列腺素F2α(PGF2α)ELISA试剂盒   心语检测(XinYu BioDetect)  

XYU-M02359 小鼠I型胶原交联C末端肽(S-CTX)ELISA试剂盒   心语检测(XinYu BioDetect)  

XYU-M02360 小鼠I型原胶原N端前肽(PINP)ELISA试剂盒   心语检测(XinYu BioDetect)  

XYU-M02361 小鼠成纤维细胞生长因子-1(FGF-1)ELISA试剂盒   心语检测(XinYu BioDetect)  

XYU-M02362 小鼠肿瘤坏死因子γ(TNF-γ)ELISA试剂盒   心语检测(XinYu BioDetect)  

XYU-M02363 小鼠肝素结合性表皮生长因子(HB-EGF)ELISA试剂盒   心语检测(XinYu BioDetect)  

XYU-M02364 小鼠组蛋白去乙酰化酶(HDAC)ELISA试剂盒   心语检测(XinYu BioDetect)  

XYU-M02365 小鼠糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)ELISA试剂盒   心语检测(XinYu BioDetect)  

XYU-M02366 小鼠尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)ELISA试剂盒   心语检测(XinYu BioDetect)  

XYU-M02367 小鼠细胞色素P450还原酶(CPR)ELISA试剂盒   心语检测(XinYu BioDetect)  

XYU-M02368 小鼠白细胞介素21(IL-21)ELISA试剂盒   心语检测(XinYu BioDetect)  

XYU-M02369 小鼠β位淀粉样前体蛋白裂解酶(BACE-1)ELISA试剂盒   心语检测(XinYu BioDetect)  

XYU-M02370 小鼠乳脂球表皮生长因子8(MFGE8)ELISA试剂盒   心语检测(XinYu BioDetect)